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快速分析婴幼儿配方奶粉中标准添加的水溶性维生素

时间:2019-07-21 03:16  来源:未知  阅读次数: 复制分享 我要评论

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  快速阐发婴幼儿配方奶粉中尺度添加的水溶性维生素_其它测验_资历测验/认证_教育专区。[应 用 纪 要 ] 快速阐发婴幼儿配方奶粉中尺度添加的水溶性维生素 Evelyn Goh Waters Pacific, Singapore 使用劣势 此方式可同时阐发12 种水溶性维生素: n

  [应 用 纪 要 ] 快速阐发婴幼儿配方奶粉中尺度添加的水溶性维生素 Evelyn Goh Waters Pacific, Singapore 使用劣势 此方式可同时阐发12 种水溶性维生素: n 简介 维生素是一种微量元素,因为人体内无法对其进行合成,只能通过食物 摄取。婴幼儿配方奶粉中的维他命元素对婴幼儿的健康成长尤为主要, 特别对无法进行母乳喂养、将配方奶粉作为次要养分来历的婴儿而言。 官方的水溶性维生素检测方式以法式化为根本,次要是微生物判定法, 此方式已利用了近十年。为达到提取目标,需对每种维生素都进行零丁 阐发,进而测定其在食物里的总含量。这凡是需花费大量时间。 利用一种检测体例同时阐发添加养分元素的婴幼儿配方奶粉中的维生素 好不容易,缘由在于: n n n n n n 替代耗时的单一化合物微生物测定法。 在复杂基质中如婴幼儿配方奶粉里检 测低浓度方针物(特别是维生素 B 12)。 n n 一次阐发便可同时获得MRM和 全扫描 数据。 维生素布局多样,化学成分复杂 维生素含量低 基质复杂 光和热下不不变 消融性问题 配方奶粉中浓度范畴广 在此使用文献中,我们将引见一种只需五分钟的快速UPLC?/MS/MS质谱检 测法,操纵ESI 正模式同时检测婴幼儿配方奶粉中的12 种水溶性维生素。 尝试 在样品预备和阐发阶段,所有溶剂均储具有低于5?C的避光处。 维生素尺度溶液每日制备。 沃特世处理方案 ACQUITY UPLC? 系统 Xevo ? TQ MS MassLynxTM 软件 TargetLynxTM 使用软件 IntelliStart? 手艺 RADAR? 环节词 水溶性维生素,维生素C、B3、B6、B12、 B1、B9、B2、B7 1 [应 用 纪 要 ] 液相前提 LC系统: 色谱柱: 色谱柱温度: 样品温度: 流速: 流动相A: 流动相B: 梯度: 时间(分钟) %A 0.0 2.0 3.0 3.1 4.0 5.0 99 99 45 1 99 99 5.0 分钟 10 μL,全充满定量环 %B 1 1 55 99 1 1 ACQUITY UPLC 系统 ACQUITY UPLC HSS T3, 2.1 x 50 mm,1.8 μm 40 °C 4 °C 0.6 mL/min 10 mM甲酸铵 + 0.1% 甲酸水溶液 10 mM 甲酸铵 + 0.1% 甲酸甲醇溶液 尺度添加法 当无法获得空白试样时,婴幼儿配方奶粉中水溶性维生素的定量阐发将 通过尺度添加法进行,(烟酰胺除外)*。在试样中添加已知浓度(尺度溶 液)的阐发溶液,使任何基质效应都可在校准时消弭。阐发员最后并未知 道试样平分析物的含量,但可对插手的尺度溶液的含量以及插手尺度溶 液后仪器响应的变化进行追踪。因而,通过校准曲线外推法可测定试样 平分析物的浓度。实践中,尺度溶液的添加体积需连结在少量程度,以 避免样品基质的稀释。 *试样基质利用现有稀释系数(见尝试步调),无尺度品添加,仪器对婴幼 儿配方奶粉中烟酰胺(B3)的响应接近检测器饱和值。若是尺度添加法用 于烟酰胺,将使检测器达到饱和。 试样预备、萃取和尺度添加 按婴幼儿配方奶粉包装申明上的三倍浓度进行制备。 将10毫升婴幼儿配方奶粉溶液放入用箔笼盖的聚丙烯(PP)管中;插手20 毫升100%浓度的乙醇。 摇晃混匀2分钟,以3500 RPM的速度离心15分钟。 上清液用0.45μmPVDF滤膜过滤。 总运转时间: 注入量: 质谱前提 MS系统: 离子化: 毛细管电压: 源温度: 脱溶剂温度: 脱溶剂气: 采集: 碰撞气: 将20μL上清液转移至样品瓶,插手10μL含11种阐发物的已知尺度浓度溶 液,样品瓶加水至1毫升(将试样基体中的阐发物稀释50倍;尺度溶液中 的阐发物最终稀释100倍)。 Xevo TQ MS ESI+ 1.0 kV 150 °C 600 °C 1200 L/ hr 多反映监测(MRM) 及RADAR全扫描 氩气 3.5 x 10 mbar -3 溶液中烟酰胺尺度曲线零丁制备。 通过LC/MS/MS进行阐发。 采集和数据处置方式 通过MassLynx软件v.4.1版本获取数据,利用TargetLynx使用办理软件进行数 据处置。 利用IntelliStart手艺对12种方针维生素进行主动MRM采集方式优 化。IntelliStart只需输入复合物的根基消息,即可主动找到母离子,优化锥 孔电压,找到子离子并优化碰撞能量。 2 快速阐发婴幼儿配方奶粉中尺度添加的水溶性维生素 每种维生素的2个MRM通道均已获得优化;第一个通道为定量离子通道,第二个通道 为定性离子通道。通道的驻留时间主动获得优化,每个色谱峰起码有12点以包管定量 重现性。阐发物的MRM通道、锥孔电压、碰撞能量、以及保留时间详见下表1。 碰撞能量 1/ 碰撞能量 2(eV) 8 12 18 34 14 20 32 20 30 18 30 20 36 16 12 20 22 14 24 12 20 18 12 14 12 36 24 16 36 16 20 14 30 24 42 3.15 3.10 3.04 2.99 2.98 2.73 0.93 0.86 0.64 0.51 0.41 阐发物 抗坏血酸 硫胺素 烟酸 吡哆醛 吡哆醇 烟酰胺 泛酸 氰钴胺 叶酸 核黄素-5-磷酸 生物素 核黄素 C B1 B3 B6 B6 B3 B5 母离子(m/z) 177.0 265.2 124.0 168.0 170.0 123.0 220.1 678.6 442.2 457.2 245.1 377.2 子离子 1/子 离子 2(m/z) 141.0 95.0 122.0 144.0 80.2 53.0 150.0 94.0 152.0 134.0 80.0 106.0 90.0 202.1 147.1 359.2 295.1 176.0 439.2 359.2 227.0 97.0 243.1 172.1 锥孔电 压(V) 16 保留时间 (分钟) 0.37 B12 B9 B2 B7 B2 表1. 检测水溶性维生素的LC/MS/MS参数。 除MRM数据外,利用Xevo TQ MS的RADAR模式可获得全扫描数据。RADAR是一种可获得丰 富消息的采集方式,获取MRM数据的同时可及时获取试样基质的布景质谱消息。利用 RADAR不会影响MRM数据的质量。 快速阐发婴幼儿配方奶粉中尺度添加的水溶性维生素 3 [应 用 纪 要 ] 成果与会商 ACQUIT Y UPLC 系统连系Xevo TQ MS的ESI正离子模式成功阐发了12 种水溶性维生素。利用ACQUIT Y UPLC 可在5 分钟内快速分手所有阐发物,包罗1分钟均衡时间,详见图1。 在统一阐发检测中,利用Xevo TQ MS的RADAR模式监测婴幼儿配方奶粉基质中化合物的全扫描质谱信 息。RADAR操纵Xevo TQ MS的快速采集速度获取全扫描MS 数据,且同时在MRM 模式下获得足够的阐发 物峰点数,以精确定量和定性。 通过RADAR可察看试样基质中的杂质,并领会可能形成基质效应的化合物含量和类别。这对LC-MS/ MS方式开辟过程中优化方式以降低基质影响带来协助。例如,可通过调整分手方式使得方针峰与可 能惹起基质影响或离子抑止的区域分手。图1中插入部门为从婴幼儿配方奶粉试样基质全扫描数据 中提取的质谱图。 Pyridoxine Pantothentic acid Thiamine Pyridoxal B3acid Biotin Riboflavin C B3-amide B2-5P B12, B9 Infant Formula Matrix 图1. RADAR手艺可通过一次阐发同时获取MRM和全扫描数据。样品基质中非方针物质谱图如嵌入的全扫描数据所示。 4 快速阐发婴幼儿配方奶粉中尺度添加的水溶性维生素 此方式检测了两种分歧公共品牌的婴幼儿配方奶粉。图2显示的是从此中一种品牌里提取的水溶性 维生素定量离子色谱图。 Ascorbic ( 抗坏血酸 acid C) (C) Pantothenic 泛酸 (B5) acid (B5) Thiamine 硫胺素(B1) (B1) Cyanocobalamin 氰钴胺 (B12) (B12) Pyridoxal 吡哆醛 (B6) (B6) 叶酸 (B9) Folic acid (B9) Pyridoxine 吡哆醇 (B6) (B6) Biotin 生物素 (B7) (B7) Nicotinamide 烟酰胺 (B3) (B3) 核黄素 (B2) Riboflavin (B2) 图2. 婴幼儿配方奶粉里提取的水溶性维生素定量离子色谱图。 收受接管率与重现性 通过比力提取前加标样品和提取后加标样品获得收受接管率。尝试分两天检测两种分歧品牌的婴幼儿配 方奶粉,每日反复进行6次。 每种婴幼儿配方奶粉的大部门化合物都达到了≥90%的提取收受接管率,吡哆醛、叶酸和核黄素-5’-磷 酸除外,收受接管率相对较低的次要缘由是上述物质的水溶性较差。 虽然婴幼儿配方奶粉是一种很是复杂的基质,6个反复样的相对尺度误差(RSDs)仍然都低于5% 。这 显示了该方式的高重现率以及不变性。 快速阐发婴幼儿配方奶粉中尺度添加的水溶性维生素 5 [应 用 纪 要 ] 配方奶粉A 阐发物 抗坏血酸 硫胺素 烟酸 吡哆醛 吡哆醇 烟酰胺 泛酸 氰钴胺 叶酸 核黄素-5-磷酸 生物素 核黄素 C B1 B3 B6 B6 B3 B5 B12 B9 B2 B7 B2 加标程度 (ng/g) 1000 10 10 10 10 10 10 10 100 100 10 10 平均收受接管率 (%) 100.4 98.7 90.3 83.5 98.9 101.6 104.2 111 .4 86.6 77.6 95.4 102.7 %RSD (n=6) 1.1 1.6 4.0 1.2 0.7 0.5 1.9 1.0 3.7 2.2 2.2 1.8 配方奶粉B 平均收受接管率 (%) 99.4 118.6 96.4 88.0 100.1 98.7 112.6 106.2 82.0 75.1 98.7 103.3 %RSD (n=6) 1.1 2.2 4.2 1.1 0.7 0.6 0.8 0.9 2.4 2.8 2.4 2.2 表2. 两种婴幼儿配方奶粉产物提取前加标样本的收受接管率和水溶性维生素RSDs百分比 。 线性和定量 线性动态范畴、活络度和适合性可通过尺度添加法进行评测。尺度添加法的一大劣势是可避免测定 基质效应,消弭离子抑止的影响。 获得相关系数≥0.99 的较好线所示,所有进行阐发的婴幼儿配方奶粉浓度范畴分歧: 抗坏血酸(C)为10 - 10000 ng/mL;氰钴胺(B12)为0.1 - 10.0 ng/mL ;其余阐发物为1到100 ng/mL 。 数据3 显示的是以尺度添加法为基准的一种婴儿配方奶粉抗坏血酸(C)和氰钴胺(B12 )的校正曲 线. 利用尺度添加法的A配方奶粉的抗 坏血酸和维生素B12 校正曲线 快速阐发婴幼儿配方奶粉中尺度添加的水溶性维生素 校正曲线为外推法,因为考虑到稀释要素(50 x),x轴截距绝对值显示婴幼儿配方奶粉平分析物的浓 度。Xevo TQ MS的活络度让我们可稀释样本以降低基质效应,同时仍可检测到方针化合物。 阐发物 抗坏血酸 硫胺素 烟酸 吡哆醛 吡哆醇 烟酰胺 泛酸 氰钴胺 叶酸 核黄素-5-磷酸 生物素 核黄素 C B1 B3 B6 B6 B3 B5 B12 B9 B2 B7 B2 R2 0.993 0.990 0.999 0.996 0.998 0.992 0.994 0.994 0.993 0.997 0.997 0.992 浓度计较 (ng/g) 198130 1778 无 205 2354 14201 8113 8.3 152 无 65 1143 表3. 校正曲线),以定量为根本,A配方奶粉中水溶性维生素的浓度计较。 快速阐发婴幼儿配方奶粉中尺度添加的水溶性维生素 7 [应 用 纪 要 ] 结论 一个利用ACQUITY UPLC与Xevo TQ MS ESI正模式5分钟快速测定法,用于同时 阐发 12种水溶性复合维生素。此法替代了耗时的维生素零丁阐发法。通 过将分歧维生素阐发法融为一体,尝试室可提高试样阐发量、削减容积 耗损、降低运作成本。 参考文献 1. AOAC Official Method 985.32, Microbiological Method for Analysis of Vitamin B6 (Pyridoxine, Pyridoxal, Pyridoxamine) in Ready-to-feed Milk-based Infant Formula. 2. AOAC Official Method 992.07, Microbiological Turbidi- Xevo TQ MS的高活络度可实此刻很是复杂的基质中检测低浓度方针阐发物 (特别是氰钴胺),如婴幼儿配方奶粉。Xevo TQ MS可达到低定量限,稀释 试样来降低基质效应。 RADAR手艺可监测基质干扰,杂质和样品中的降解物,同时精确定量方针 阐发物。阐发员在检测基质效应时便可做出精确决策,并可精确评价基 质效应能否有具有。 IntelliStart手艺简化系统预备和MRM方式开辟,确保所有条理的科学家均可 快速精确地操作仪器,生成最高质量的可重现的UPLC/MS/MS数据。 metric Method of Pantothenic Acid in Milk-based Infant Formula. 沃特世科技 (上海) 无限公司 沃特斯中国无限公司 Waters,ACQUITY UPLC和Xevo是沃特世公司的注册标。 MassLynx、TargetLynx、RADAR、IntelliStart和The Science of What’s Possible是沃特世公司商标。所有其他商标属于各自的所 有者。 ?2010 沃特世公司 中国印刷 2010 年 11 月 720003694ZH 北京金欧亚科技成长无限公司 上海: 021 - 6156 2666 北京市崇文区左安门内大街 8号伟图大厦301 广州: 020 - 2829 6555 北京: 010 - 5209 3866 电线 免费售后办事热线

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